Вплив блокади клітинних протеїнкіназ на апоптоз сітківки при експериментальній діабетичній ретинопатії

Abstract

У експериментальних та клінічних дослідженнях підтверджено, що прогресуюче погіршення гостроти зору при діабетичній ретинопатії (ДР) є наслідком апоптозу нейрональних структур сітківки і фіброваскулярної проліферації на очному дні. Метою нашого дослідження було встановлення стану апоптозу сітківки при експериментальній ДР та вплив на нього блокади клітинних протеїнкіназ. Експериментальну ДР моделювали у щурів-самців лінії Вістар введенням стрептозотоцину (50 мг/кг; “Sigma-Aldrich”, Китай). Тваринам 1-ї групи (контроль) лікування гіперглікемії не проводили. У 2-й групі тваринам через день вводили інсулін (“Actrapid HM Penfill”, Данія) у дозі 30 Од. Тваринам 3-ї групи вводили розчин інгібітора протеїнкіназ сорафенібу (“Cipla”, Індія) у дозі 50 мг/кг. Тваринам 4-ї групи вводили інсулін (за схемою 2-ї групи) і розчин сорафенібу (за схемою 3-ї групи). Вміст каспази-3 та протеїну Bax у лізатах тканини сітківки визначали методом імуноблотингу, також імуногістохімічно вивчали експресію каспази-3 (“ThermoFisher Scietific”, США). При розвитку ДР вміст у сітківці як попередників, так і активних форм проапоптотичних протеїнів каспази-3 і Bax змінювався односпрямовано і приблизно рівномірно. Окреме застосування сорафенібу не впливало на індуковану гіперглікемією активацію апоптозу сітківки, тоді як введення інсуліну (і окремо, і у комбінації з сорафенібом) суттєво знижувало вміст обох проапоптотичних протеїнів, що свідчило про пригнічення апоптозу, який був індукований при розвитку ДР. Результати імуногістохімічного дослідження підтвердили збільшення експресії каспази-3 у гангліонарних клітинах, відростках та тілах астроцитів і клітин Мюллера, що супроводжувало стан реактивного гліозу, характерний для розвитку ДР. Зниження інтенсивності апоптозу під впливом інсуліну та його комбінації з сорафенібом могло відображати блокування інсуліном проапоптотичного ефекту сорафенібу. При цьому зберігалося притаманне дії сорафенібу попередження розвитку морфологічних ознак ДР.